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耐药细胞株培养小技巧
点击次数:244 发布时间:2018-07-23
  耐药细胞株的建立实验是通过细胞与低剂量的药物长期接触,引起细胞本身生物化学过程的改变,细胞膜上出现Pgp(或P-170)糖蛋白,使细胞逐渐对药物耐受。
  耐药细胞株培养小技巧:
  1. 买细胞要去靠谱的地方买,比如 ATCC 或者然泰生物。一般上面会有针对细胞的介绍,这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。
  2. 不管是买的细胞,还是别人惠赠的细胞,刚拿到手赶紧的做两件事:检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存,冻存细胞复苏后第二天更换一次培养基。
  3. 发现细胞有污染迅速处理掉,特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。
  4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快,比如说 MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢,比如 BT474,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。
  5. 对于娇弱的细胞,就得细心呵护。胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住,是每天。
  耐药细胞株注意事项:
  1、观察细胞在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。
  2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基,细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。
  3、有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心吹打后接种到新瓶内。
  4、收到细胞后,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请及时与我们。
  耐药细胞株的安全性:所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后,在倒置镜下(4X物镜)观察整个细胞生长情况。 上一篇 筛选稳定报告基因慢病毒细胞株的方法 下一篇 GPCR细胞株经过了严格的测试
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