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筛选稳定报告基因慢病毒细胞株的方法
点击次数:207 发布时间:2018-08-23
  报告基因慢病毒细胞株用于上调基因的高纯度慢病毒进行特定稳转细胞株筛选,适用于在各类细胞中稳定过量表达不同大小的外源基因。报告基因慢病毒细胞株应用于任何物种基因组特定位点的精确编辑,并进行细胞水平单基因或多基因敲除;结合Cas9技术同时导入针对潜在位点的多个sgRNA,敲除多个基因位点产生突变,模仿疾病的发生,通过改造得到一系列疾病模型;通过修正某些致病基因,可进行单基因遗传病的研究。
  筛选稳定报告基因慢病毒细胞株的方法:
  1)转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系
  2)慢病毒感染筛选稳定细胞系
  慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达,因此,慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。
  报告基因慢病毒细胞株方法如下:
  1、将细胞稀释到1000个细胞/mL,接种到24孔板,每孔1ml。
  2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。3、每隔3天跟换1次培养液,保持G418浓度不变。
  4、选择出在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同,一般变动在100ug/ml~1000ug/ml范围。
  报告基因慢病毒细胞株的慢病毒过表达技术服务是根据客户的要求,将相应的基因序列插入慢病毒过表达载体,通过多质粒共转包装获得慢病毒毒液,然后使用毒液感染目标细胞,并进一步筛选获得稳转细胞株系。 上一篇 没有了 下一篇 耐药细胞株培养小技巧
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