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反转录PCR

反转录PCR

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反转录PCR(Reverse Reaction,RT-PCR)又称为逆转录PCR。其原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。

反转录PCR的详细资料:

反转录PCR

反转录PCRReverse ReactionRT-PCR)又称为逆转录PCR。其原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA

价格与周期:

实验项目/片段长度

小于1000bp

1000-2000bp

2000-3000bp

mRNA抽提

600

600

600

反转录合成cDNA第一链

200

400

800

PCR扩增双链cDNA

300

500

1000

纯化PCR产物,克隆PCR产物到标准载体测序

200

300

500

亚克隆到其他表达载体(可选)

1000

1200

1500

全部实验依据实验难度一般需要2-4周的时间

服务流程:

1mRNA抽提

2、反转录合成cDNA第一链

3PCR扩增双链cDNA

4、纯化PCR产物,克隆PCR产物到标准载体测序

5、亚克隆到其他表达载体(可选)

样品要求:

1 样品可提供组织、细胞、RNAcDNA中的一种,对于提供样本的大致原则如下:组织样本,尽可能提供2×2×2mm3体积或以上,新鲜组织可直接提供,不需处理;对于细胞样本,尽可能提供3×10^6个细胞左右,加适量Trizol处理即可,确保样品适于RNA抽提。RNAcDNA含量根据同等细胞数量的细胞抽提和逆转录大致界定, 如果提供RNAcDNA我们要对您提供的材料进行评估。

2、客户提供尽可能详细的背景信息;物种信息,扩增目的基因的NCBI登录号等。

3、由于材料的个体差异及PCR过程中会产生突变等原因,我们不保证获取的基因与参考序列的碱基完全一致。

4、运输要求,液氮或干冰保存寄送。

注:样本应避免各类污染和反复冻融。

提交的产品和资料:

1.测序图谱,酶切位点图;

2.含有目的基因的质粒及穿刺菌;

3.反转录PCR完整的实验步骤、使用仪器、软件设置参数等。


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